技術(shù)知識
細胞破碎方法有哪些?
液體剪切壓力:
通過(guò)將樣品從高壓腔轉入到低壓腔時(shí)產(chǎn)生的快速壓力落差來(lái)破碎細胞
優(yōu)點(diǎn):破碎快速有效,適合大體積細胞破碎
缺點(diǎn):可導致樣品溫度升高(操作時(shí)需要冷卻系統)
超聲
通過(guò)高頻率的超聲波破碎細胞粉碎
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)單
缺點(diǎn):可導致樣品溫度升高,其很難通過(guò)冷卻系統降溫,剪切力有可能導致蛋白質(zhì)受損,噪音較大,破碎量較小
玻璃珠磨碎
用玻璃珠的攪動(dòng)來(lái)磨碎細胞
優(yōu)點(diǎn):對于很難破碎的細胞(如酵母)非常有用
缺點(diǎn):有些慢且有噪音
滲透壓
從高滲透壓轉向低滲透壓介質(zhì)
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,花費低廉
缺點(diǎn):僅用于外壁較脆弱的細胞(如動(dòng)物細胞)
反復凍融
通過(guò)反復形成冰晶破碎細胞;通常結合酶法裂解下細胞
優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,花費低廉,產(chǎn)生大量細胞膜碎片
缺點(diǎn):慢,也許會(huì )損傷敏感蛋白質(zhì)或者破壞蛋白質(zhì)和細胞膜的相互作用,產(chǎn)量低
酶法裂解
常和其他技術(shù)一同使用,如反復凍融或滲透壓破碎法;溶菌酶是破碎細菌細胞壁最常用的酶
優(yōu)點(diǎn):溫和,可產(chǎn)生較大的細胞膜碎片
缺點(diǎn):慢,產(chǎn)量低
